Провокации при гонорее - методы и методики обследования больных с кожными и венерическими заболеваниями. «сенсорно-моторная реакция

Цито-бактериоскопический метод . Гонорейное поражение мужских и женских половых органов распознается главным образом путем микроскопического исследования выделений из желез преддверия, уретры, цервикального канала. Нахождение в этих секретах гонококков подтверждает гонорейный характер данного заболевания. Несмотря на многие недостатки, бактериоскопический метод остается до настоящего времени основным методом диагностики гонореи . Остальные методы следует считать дополнительными.

К важнейшим недостаткам бактериоскопического метода следует отнести то, что не всегда удается обнаружить гонококки даже при повторном исследовании и в особенности в хронических случаях, а также трудность дифференцирования гонококков от другой бактериальной флоры. В. И. Константинов и А. С. Жарковская обнаружили гонококки при хронической гонорее у 20-30% женщин, Е. П. Майзель - у 40%, А. И. Петченко - у 31%. Бактериоскопический метод требует повторных исследований; однократное бактериоскопическое исследование при хронической гонорее обнаруживает гонококки лишь в незначительном проценте случаев. Чем длительнее заболевание, тем меньше шансов найти гонококки без применения провокации не только в первичном мазке, но и в последующих.

Если бактериоскопически гонококки обнаружены, то диагноз ясен. Если же они не найдены, то возможность гонореи все же не исключена; в этих случаях необходимо обратить внимание на атипичные формы гонококков. Крайне важно также обратить внимание на характер отделяемого (гной, слизь, серозная жидкость) и особенно на количество в нем форменных элементов (лейкоциты, плоские клетки) и отношение микрофлоры к лейкоцитам.

По Г. А. Бакшту и А. И. Петченко, различают три основных цито-бактериоскопических картины гонореи.

Картина первая. Большое количество сегментированных лейкоцитов (экссудат) при отсутствии посторонней флоры, гонококки расположены внутри или внеклеточно.

Картина вторая. Та же цитологическая картина, но без гонококков. Посторонняя флора отсутствует. Эта картина обнаруживается весьма часто при хронической гонорее и может перейти в первую после провокации. Таким образом, лейкоцитоз без посторонней флоры может считаться картиной, подозрительной на гонорею.

Картина третья. Небольшое количество бесструктурных лейкоцитов в состоянии некробиоза. Обилие посторонней флоры. Появление посторонней флоры следует считать переломом в сторону улучшения при лечении; первыми после гонококка появляются кокковые формы, за ними - грамдиплококки, коккобациллы, палочковидные формы; появление палочковидных форм свидетельствует о начале выздоровления и в большинстве случаев исключает наличие гонококков.

Существует непрерывная динамика изменений картин мазков под влиянием лечения и даже времени.

Бактериологическое исследование . Бактериологический метод диагностики, наиболее доказательный и точный, на практике не получил большого распространения из-за своей сложности и длительности. Большинство авторов считает, что для распознавания гонореи достаточно бактериоскопического исследования.

В связи с развитием учения о сульфаниламидорезистентных формах гонореи методу бактериологических посевов вновь стали придавать большое значение. По Хагерману (Hagermann), гонорея, перешедшая в латентную фазу в результате неполноценной сульфаниламидотерапии, может долго не обнаруживаться бактериоскопически, и только методом посева можно выявить гонококки.

Реакция связывания комплемента по Борде-Жангу . Борде вместе с Жангу разработали технику реакции фиксации комплемента при гонорее.

По концепции В. Е. Дембской, реакция Борде-Жангу не является показателем инфекции, а указывает на сенсибилизацию организма данным инфекционным агентом.

Для постановки реакции Борде-Жангу берут из кубитальной вены в пробирку 5-6 мл крови. В последние годы предлагают пользоваться небольшим количеством крови, полученной из укола шейки матки. Если необходимо переслать кровь на далекое расстояние (в участковой практике), можно пользоваться высушенной сывороткой. Для этого кровь оставляют при комнатной температуре на три часа. После образования свертка его отделяют от стенок пробирки стеклянной палочкой, пробирку же переносят в прохладное место. На следующий день на листок вощаной бумаги размером 6-8 см наливают 0,5 мл сыворотки и дают ей просохнуть в течение суток, предохраняя от солнечного света и пыли. Бумажку с высохшей (в виде стекловидной пленки) сывороткой свертывают подобно аптекарскому порошку и пересылают в лабораторию. Срок годности высушенной сыворотки 10-15 дней.

Большинство авторов признает, что при гонорее нижнего отдела гениталий у женщин реакция Борде-Жангу дает положительный результат лишь в 5-20%. При гонорее верхних отделов эта реакция в большинстве случаев (от 40 до 100%) выпадает положительно. При пиосальпинксах и аднекситах реакция более выражена; при периметритах, периаднекситах и эндометритах - меньше. Лишь в тех случаях гонореи, когда имеются осумкованные очаги в бартолиниевой железе, уретре, цервикальном канале, реакция Борде-Жангу выпадает положительно. Отсюда можно сделать вывод, что результаты реакции зависят не от наличия гонококков в выделениях, а от клинического проявления заболевания, причем глубоко гнездящиеся очаги поражения, обильно омываемые кровью и лимфой, обычно вызывают положительную реакцию.

Реакция Борде-Жангу очень ценна для установления этиологии аднекситов и артритов неясного происхождения. Но она теряет свое значение, если проводилось длительное лечение гоновакциной. Введение гоновакцины здоровым людям вызывает положительную реакцию Борде-Жангу, длящуюся от 1 до 3 месяцев. О сроке наступления положительной реакции после заражения авторы дают различные данные, колеблющиеся между четырьмя днями и шестью неделями; средним сроком следует считать две недели. Относительно времени исчезновения положительной реакции Борде-Жангу после выздоровления нет единого мнения.

В. Е. Дембская, считая эту реакцию показателем аллергических сдвигов в организме, допускает, что она может иметь прогностическое значение (больные, у которых отмечается отрицательная реакция, резистентны к стрептоциду), но отрицает пригодность этой реакции в качестве критерия излеченности.

Реакция Лисовской . Основываясь на работах Дебре и Параф, предложивших определение туберкулезного антигена в моче для диагностики туберкулеза мочевых путей, С. Н. Лисовская предложила применять этот метод для определения гонококкового антигена в моче больных, подозрительных на гонорею. Методика реакции Лисовской заключается в следующем: к испытуемой моче прибавляют противогонококковую сыворотку и комплемент; если в моче содержится гонококковый антиген, то получается отклонение комплемента, при добавлении гемолитической системы гемолиз не наступает. Другие авторы, а также и мы, считают этот метод малоудовлетворительным, так как в 30% случаев наблюдалось несовпадение реакции с результатами клинического исследования.

Реакция Фейгеля . И. И. Фейгель для диагностики женской гонореи, в особенности хронических или латентных форм, предложил реакцию на антиген с выделениями из цервикального канала.

Сущность реакции состоит в том, что с выделениями из цервикального канала ставится реакция отклонения комплемента; это - реакция Борде-Жангу только в обратном порядке: цервикальные выделения служат антигеном, а в качестве антитела берут сыворотку животного, иммунизированного культурой гонококков.

Техника получения материала: на шейку матки на 12-24 часа одевают колпачок Кафки, после чего колпачок с выделениями помещают в стерильную посуду и отправляют в лабораторию для приготовления из выделений антигена. Результаты реакции, по данным Фейгеля, положительные в 80-91,2%. По этому же автору, реакция становится отрицательной после излечения (через 2-4 месяца); таким образом, она имеет значение для критерия излеченности. Ценность реакции для диагностики латентной гонореи подтверждена рядом авторов.

Вакцинодиагностика . Введение гоновакцины - один из старых методов диагностики гонореи. И. Г. Бурлаков, А. Э. Мандельштам, А. И. Петченко, С. М. Беккер считают кожную реакцию весьма ценной для диагностики; по Бурлакову, кожная реакция дает правильный ответ в 70%, по Беккеру - в 75%, по Мандельштаму - в 70-90% и по Петченко - в 97% случаев гонореи.

Кожная реакция подтверждает наличие гонорейного процесса, не показывая активности его; она читается через 48 часов, в первые же сутки считается неспецифической. Реакция остается на некоторое время и по прекращении заболевания.

Выгодно пользоваться высокими титрами (2 млрд. микробных тел в 1 мл); впрыскивают 0,1 мл гоновакцины в верхне-наружную часть бедра. Реакция читается так: 1) краснота около 1 см в диаметре с заметной инфильтрацией - слабоположительная (+); 2) резкая краснота более 1 см в диаметре с ясно ограниченной инфильтрацией - положительная (+ +); 3) те же явления, но при наблюдении через 72 часа - резкоположительная реакция (+ + +). Реакция исчезает через три-четыре дня.

Регионарное (местное) введение гонококкоковой вакцины для диагностики гонореи было предложено Пуанклю и разработано у нас И. Г. Бурлаковым.

Регионарная реакция доказывает, по Бурлакову, наличие живых возбудителей в области локализации процесса, так как в основе этой реакции лежит резкое усиление окислительных процессов, местный ацидоз, а окислительные процессы возможны только при условии, если деструкции подвергаются живые возбудители. В этом основное отличие регионарной реакции от кожной. Техника регионарной реакции заключается в том, что вводят 0,2 мл гонококковой вакцины (400 млн. микробных тел) в слизистую цервикального канала или в слизистую влагалища. Положительной реакцией считают повышение температуры до 38° (+), повышение температуры до 39° - ясно положительной (+ +) и повышение до 40°-резкоположительной реакцией (+ + +).

Кроме повышения температуры, реакция сопровождается ознобом, головной болью, иногда рвотой и местными болями (в области пораженных придатков). Реакция наступает через 15-45 минут и продолжается в течение 2-16 часов. Наивысший подъем температуры наблюдается через три-четыре часа после введения вакцины. Положительные результаты регионарной реакции при явной гонорее наблюдаются в 94,6%, при подозреваемой - в 67,7%. Регионарная реакция сочетает в себе элементы провокации, поэтому на следующий день после введения вакцины следует брать повторно мазки для бактериоскопии. Отрицательной стороной регионарного метода являются бурные реакции, поэтому применение этого метода противопоказано в амбулаторной практике и ослабленным больным.

Определение морфологии крови . Влияние токсина гонококков на морфологию крови больных своеобразно; оно касается, главным образом, состава белой крови. Изменения клеток гноя и крови при лечении гонореи были подробно изучены Е. А. Сельковым. Лейкоцитоз при гонорее, по данным ряда авторов, не повышается, оставаясь большей частью в пределах 4000-10 000 лейкоцитов в 1 мм3 крови. Иногда обнаруживается повышенный лейкоцитоз при острой гонореей при асцендировании процесса. В 89% случаев гонореи верхних отделов женской половой системы лейкоцитоз остается в пределах нормы и только в 11% он превышает 10 000. Ограниченность процесса, малая связь с общим крово- и лимфообращением является причиной нормального лейкоцитоза при гонорее. Когда условия всасывания лучше (в послеродовом периоде, при генерализации процесса), отмечается высокий лейкоцитоз. Наиболее значительный лейкоцитоз наблюдается в тех случаях, когда имеется комбинация гонорейных пиосальпинксов с перипараметритами, что можно объяснить смешанной инфекцией. В противоположность гонорейным аднекситам, параметриты, как заболевания, не характерные для гонореи, дают высокие цифры лейкоцитоза (12 000-20 000 и выше).

В гемограмме крови наибольшее практическое значение при гонорее имеют изменения количества лимфоцитов и эозинофилов. Эозинофилию считают характерной особенностью крови гонорейных больных. Ланге наблюдал значительную эозинофилию (15-20%) при гонорейных эндометритах а аднекситах. А. В. Файнштейн, изучая морфологические изменения крови при воспалениях придатков различной этиологии, нашел, что только при гонорейных аднекситах встречается эозинофилия (4,5-12%). Увеличение эозинофилов указывает на защитную реакцию организма, которая наступает, по-видимому, быстрее, чем при других инфекциях. Эозинофилия в крови, как признак аллергического состояния, может наступить и после введения гонококковой вакцины, поэтому исследование крови на лейкоцитарную формулу следует производить до вакцинации, а не наоборот. По Е. А. Селькозу, эозинофилы появляются при местном лечении в выделениях на третьи-пятые сутки и служат признаком неосложненного течения гонореи, они нейтрализуют эндотоксины.

Лимфоцитоз в крови при гонорее (свыше 25%) находили М. А. Теребинская-Попова, Л. Л. Окинчиц, А. И. Петченко и др. В остром периоде и при обострениях гонореи, в особенности при пиосальпинксах или пельвеоперитонитах, ни лимфоцитоза, ни эозинофилии не бывает; наоборот, наблюдается кратковременная лимфопения, снижение числа или исчезновение эозинофилов. С прекращением острых воспалительных явлений лимфопения переходит в лимфоцитоз, увеличивается количество эозинофилов. С этими оговорками можно считать, что лимфоцитоз и эозинофилия являются частыми и характерными спутниками гонореи. Мы находили лимфоцитоз при женской гонорее в 70-73,3%, а эозинофилию - в 45-60% случаев.

Реакция оседания эритроцитов . Значительное ускорение дает острая гонорея верхнего отдела гениталий; уретриты и эндоцервицита даже с обильным гнойным отделяемым не дают заметного ускорения РОЭ. При гонорее придатков чаще наблюдается ускорение реакции; в этих случаях она может помочь диагностике, особенно при сопоставлении с лейкоцитозом. Триада - нормальный лейкоцитоз, ускоренная реакция оседания эритроцитов, положительная реакция на гоновакцину - позволяет ставить предположительный диагноз гонореи R тех случаях, когда гонококки длительное время не обнаруживаются.

Антиген, комплемент и вспомогательная, индикаторная или гемолитическая система - гемолитическая сыворотка и эритроциты барана.

Если в первой системе образуются специфический комплекс антиген + антитело, то комплемент адсорбируется (соединяется с этим комплексом) и гемолиза во второй системе не происходит.

Для реакции требуется:

1. Испытуемая сыворотка, которая получается из крови, взятой пункцией локтевой вены больного. После свёртывания крови сыворотка отсасывается в отдельную пробирку и инакти-вируется 30 минут при 56 °С на водяной бане.

2. Антиген - взвесь убитых гонококков.

3. Эритроциты барана получают из стерильно взятой де-фибринированной крови. Их отмывают, центрифугируя 3 раза с новыми порциями физиологического раствора. В реакции используют 3 %-ю взвесь эритроцитов.

4. Гемолитическая сыворотка готовится заранее путём иммунизации кроликов эритроцитами барана. Перед употреблением производится титрование сыворотки.

5. Комплемент - свежая сыворотка морской свинки. Из сердца морской свинки шприцем насасывается кровь, после свёртывания отделяется сыворотка. Перед опытом вытитровы-вается рабочая доза комплемента. Для этого берут основное разведение комплемента 1:10 и разливают его по пробиркам от 0.1 до 0,5, после чего объем в каждой пробирке доводят физиологическим раствором до 1,5 мл.

Одновременно заготавливают гемолитическую систему -разведенная в тройном титре, гемолитическая сыворотка + 3 % взвесь эритроцитов барана. Оба ингредиента в разных объемах и выдерживают в термостате 30 минут (сенсибилизация смеси), после чего смесь добавляют по 1 мл в пробирки и помещают в термостат на 30 минут. Контролем служат 2 пробирки:

1. 1 мл гемолитической системы + 1,5 мл физиологического раствора;

2. 0,5 мл комплемента 1:10 + 0,5 мл взвеси эритроцитов + 1,5 мл физиологического раствора.

Титром комплемента называется его минимальное количество, при котором ещё происходит гемолиз. Для постановки реакции берут рабочую дозу комплемента, увеличенную против титра на 20-25 %, т.е., обычно то количество комплемента, которое имеется в предпоследней пробирке с гемолизом. Увеличение дозы комплемента необходимо потому, что в реакции активность комплемента может оказаться несколько подавленной другими ингредиентами реакции (антиген, сыворотка).
43)РСК Вассермана

Ставится для диагностики сифилиса с целью обнаружения антител, а также для определения эффективности специфической терапии. Она основана на принципе реакции связывания комплемента Борде-Жангу. Существенным отличием реакции Вассермана является неспецифичность антигена: в качестве антигена употребляют липоидные экстракты из нормальных органов животных

Для постановки реакции Вассермана необходимо иметь сыворотку больного, диагностикумыперекрестнореагирующие антигены № 1, № 2, комплемент, гемолитическую сыворотку, эритроциты барана, физиологический раствор.

Диагностикум № 1 - специфический, трепонемный.

Диагностикум № 2 - неспецифический, кардиолипиновый антиген, которые представляют собой высокоочищенные экстракты бычьего сердца, имеющие постоянный химический состав липоидов. Липоиды, по химическому составу близки к липоидам бледной трепонемы, поэтому, хотя и не являются специфическими, но фиксируют антитела против спирохеты.

Указанные антигены выпускаются централизованно и в реакцию употребляются разведёнными согласно титру, указанному на этикетке.

Одновременно с основным опытом ставят 2 контроля: с заведомо отрицательной и с заведомо положительной сыворотками.

Постановка основного опыта

Вначале в 4 пробирки разливается инактивированная и разведённая 1:5 испытуемая сыворотка. Затем в 2 пробирки разливаются антигены (№ 1, № 2), в 3-ю пробирку - физиологический раствор. После этого во все пробирки добавляется рабочая доза комплемента. После смешивания ингредиентов штатив с пробирками помещается в термостат при 37 °С на 30 минут. После выдерживания в термостате во все пробирки добавляется гемолитическая система. Пробирки снова помещают в термостат на 2 часа, в затем оставляют при комнатной температуре. На следующий день отмечают результат Степень интенсивности реакции оценивается, четыре плюса (++++), три (+++) два (++) и один (+) - в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне. Полный гемолиз обозначается (-) минусом. При резком расхождении результатов с различными антигенами опыт повторяют с новой порцией крови.
44)РИТ-р. Иммобилизации бледной трепонемы.

Эту реакцию применяют как в диагностических целях, так и для распознавания ложноположительных результатов стандартных серологических реакций, особенно при скрытом сифилисе.

РИБТ заключается в том, что в присутствии иммобилизинов сыворотки больных сифилиса и активного комплемента бледные трепонемы теряют подвижность.

РИБТ ставят в стерильных боксах. В реакции участвуют испытуемая сыворотка, комплемент и антиген.

В РИБТ антигеном является взвесь бледных трепонем из яичка кролика в ранние сроки (7-8 суток после заражения) сифилитического орхита. Специальная среда взвеси сохраняет жизнеспособность бледных трепонем не менее суток. В РИБТ применяют комплемент морских свинок. РИБТ протекает в анаэробных условиях. Пробирки с ингредиентами помещают в микроанаэростат, из которого отсасывается атмосферный воздух и нагнетается газовая смесь (95 частей азота и 5 частей углекислого газа). Микроанаэростат с пробирками помещают в термостат (35°С) на 18-20 часов.

Параллельно с постановкой реакции производят контрольные исследования с положительной и отрицательной сывороткой крови, взятыми из предыдущего опыта.

Оценку результатов РИБТ производят после извлечения пробирок из термостата (т.е. через 18-20 часов опыта). Пастеровской пипеткой на предметное стекло наносят каплю содержимого пробирки, которую накрывают покровным стеклом и исследуют в темном поле микроскопа (объектив 40, окуляр 10). При иммобилизации до 20% бледных трепонем реакцию считают отрицательной, от 21 до 30% - сомнительной, от 31 до 50% слабоположительной, от 51 до 100% - положительной. Процент иммобилизации бледных трепонем определяют по специальной таблице.

45) Опсоно-фагоцитарная реакция

Механизм: усиление фагоцитоза микробных клеток под влиянием содружественного воздействия антител, иммунной сыворотки и комплемента.

Компоненты реакции:

1) антиген - суточная микробная культура;

3) комплемент - свежая сыворотка морской свинки;

4) фагоциты - лейкоцитарная взвесь.

Опсонины - это антитела, которые содержатся в нормальных и иммунных сыворотках и подготавливают микробы к фагоцитозу.

Реакция ставится в специальных пробирках при t=37°» минут. Затем из каждой пробирки готовят мазки, считают по, 100 фагоцитов и определяют число фагоцитированныхмикрсконтроле.

Опсонический индекс = фагоцитарный показате. сыворотки/фагоцитарный показатель нормальной сывороп

Чем выше опсонический индекс (должен быть >1), исследуемая сыворотка, и, следовательно, тем выше им! бруцеллезе).

Применяется для олределения опсонинов - антител, стимулирующих фагоцитарную активность лейкоцитов, т.е. серодиагностики инфекций, например, бруцеллёза.

Усиление фагоцитоза происходит за счёт присоединения опсонинов с активными центрами (Рав-фрагмент) к детерминантам бактерий, а затем с помощью Рс-фрагментов к Рс-рецепторам фагоцитов. В нормальной сыворотке содержится небольшое количество опсонинов, которые проявляют свое действие в присутствии комплемента. В иммунной сыворотке опсонинов больше, и их активность в меньшей степени зависит от комплемента.

Компоненты:

Исследуемая сыворотка

Нормальная сыворотка

Суточная микробная культура (напр., стафилококковая)

Фагоциты - взвесь нейтрофилов

Инкубация при 37 °С в течение 30 минут. Из каждой пробирки готовят мазки, окрашивают по Романовскому-Гимзе и считают под микроскопом количество микробов, в 100 и более нейгрофилах , т.е. определяют фагоцитарный показатель.

Фагоцитарный показатель - количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом.

Опсонический индекс фагоцитарный показатель иммунной (исследуемой) сыворотки / фагоцитарный показатель нормальной сыворотки.

Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), тем выше иммунитет.

Опсоно-фагоцитарный индекс - это цифровой показатель = количество фагоцитов х оценка фагоцитоза (в зависимости от количества поглощенных микробов). Максимальный показатель -75.

46) РН на мышах с целью установления экзотоксина

В основе этой реакции лежит способность специфической антитоксической сыворотки нейтрализовать экзотоксин.

Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией.

Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген-антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микро­организмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о спе­цифичности взаимодействия комплекса антиген-антитело.

Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свин­кам, мышам). Контрольным животным вводят фильтрат исследу­емого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сыво­роткой, животные опытной группы останутся живыми. Контрольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.

Реакция нейтрализации экзотоксина происходит при его взаимодействии с антитоксической сывороткой (антитела-антитоксины). В результате образовании комплекса антиген-антитело токсин теряет свои ядовитые свойства.

Реакцию нейтрализации проводят с целью обнаружения и титрования токсинов, анатоксинов или антитоксинов.

Токсины получают путем фильтрования жидкой питательной среды или исследуемого материала, где размножались токсигенные бактерии. При обработке формалином в течение 30-45 дней при температуре 37°С токсин превращается в анатоксин, который используют для иммунизации животных с целью получения антитоксической сыворотки.

Реакция нейтрализации invivo. Для определения типа токсина его смешивают с диагностической антитоксической сывороткой и эту смесь вводят белым мышам. При нейтрализации токсина антитоксической сывороткой мыши не погибают.

Реакцию нейтрализации используют для определения антитоксического иммунитета у детей при дифтерии (проба Шика) и скарлатине (проба Дика). Для этого в область предплечья внутрикожно вводят определенное количество соответствующего токсина (1/40 DLM). При наличии в организме антитоксинов произойдет нейтрализация токсина и реакция будет отрицательной. При отсутствии антитоксинов в организме возникает воспалительная реакция на месте введения токсина.
47)РН(Реакция Нейтрализации) на мышах с целью идентификации вируса клещевого энцефалита

Вирус КЭ патогенен для ряда лабораторных и диких животных. Наибольшей чувствительностью обладают новорожденные и молодые белые мыши. После заражения в мозг, интраперитонеально, внутримышечно у этих животных развивается энцефалит, заканчивающийся гибелью животных. Из сельскохозяйственных животных наиболее восприимчивы к вирусу КЭ козы , менее восприимчивы овцы и коровы, и слабо восприимчивы лошади. Вирус КЭ обладает цитопатогенным действием (ЦПД), вызывая цитопатические изменения в первичных и перевиваемых культурах клеток почек эмбриона свиньи (СПЭВ и ПЭС) и размножается без выраженного ЦПД во многих других клеточных культурах. В мозге инфицированных мышей и культуральной жидкости зараженных культур происходит накопление вируса КЭ и специфических вирусных антигенов: комплементсвязывающих, гемагглютинирующих, преципитирующих и др.

Вирус КЭ длительное время сохраняется при низких температурах (оптимальный режим -60 град. С и ниже), хорошо переносит лиофилизацию, в высушенном состоянии сохраняется много лет, но быстро инактивируется при комнатной температуре. Кипячение убивает его через 2 минуты, а в горячем молоке при 60 град. С погибает через 20 минут.

Инактивирующим действием обладают также формалин, фенол, спирт и другие дезинфицирующие вещества, ультрафиолетовое излучение.

Реакция нейтрализации основана на способности специфических иммунных сывороток гасить инфекционное действие вирусов. Применяется в двух направлениях:

1) для типирования выделенных вирусов;

2) для титрования антител в сыворотках переболевших.

Постановка реакции:

1. На лабораторных животных. Критерием наличия вируса

служит гибель лабораторных животных. Высчитывается LD50

Предельное разведение вирусной суспензии, которое

вызывало гибель 50% зараженных животных. Для

идентификации вируса клещевого энцефалита проводят

внутримозговое заражение белых мышей.

2. В тканевых культурах. Учет результатов проводят

По цитопатическому действию (ЦПД)

По методу цветной пробы, основанной на изменении цвета

По гемадсорбции.

3. В Курином эмбрионе. Учет результатов проводится по

появлению оспин по хорионаллантоисной оболочке.

48)РТГА

Эта реакция применяется в вирусологической практике:

Для определения типа вируса (на стекле);

Для обнаружения в сыворотке больных (развернутая).

При постановке ориентировочной реакции торможения гемагглютинации на стекло наносят по 1 капле типоспецифических иммунных сывороток, затем добавляют по 1 капле испытуемого материала и 1 капле 5% взвеси эритроцитов.

Учет результатов: тип вируса определяют по той сыворотке, с которой реакция не произошла, так как иммунная сыворотка, специфическая для выделенного вируса, подавляет его гемагглютинирующую активность, и эритроциты не агглютинируются.
49)РИФ

В качестве метки используются светящиеся флюорохром-ные красители (изотиоционатфлюорисцеина и др.).

Существуют различные модификации РИФ. Для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний - для выявления микробов или их антигенов в исследуемом материале применяется РИФ по Кунсу.

Выделяют два метода РИФ по Кунсу: прямой и непрямой.

Компоненты прямой РИФ:

1) исследуемый материал (испражнение, отделяемое носоглоткой и др.);

2) меченая специфическая иммунная сыворотка, содержащая АТ-ла к искомому антигену;

3) изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала обрабатывают меченойантисывороткой.

Происходит реакция АГ-АТ. При люминесцентном микроскопическом исследовании в том участке, где локализуются комплексы АГ-АТ, обнаруживают флюоресценцию - свечение.

Компоненты непрямой РИФ:

1) исследуемый материал;

2) специфическая антисыворотка;

3) антиглобулиновая сыворотка (АТ-ла против иммуноглобулина), меченая флюорихромом;

4) Изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала сначала обрабатывают иммунной сывороткой к искомому антигену, а затем - меченой антиглобулиновой сывороткой.

Светящиеся комплексы АГ-АТ - меченые АТ обнаруживаются при помощи люминесцентного микроскопа.

Преимущество непрямого метода состоит в том , что нет необходимости приготовления широкого набора флюоресцирующих специфических сывороток, а применяется лишь одна флюоресцирующая антиглобулиновая сыворотка.

Также выделяют 4-компонентную разновидность непрямой РИФ, когда дополнительно вводится комплемент (сыворотка морской свинки). При положительной реакции образуется комплекс АГ-АТ - меченые - АТ-комплемент.

Реакция относится к серологическим реакциям с участием меченых антигенов или антител.

Проводится прямым и непрямым методами.

При прямом методе обнаруживают антиген в материале от больного. Используется диагностическая флюоресцирующая сыворотка, которая содержит иммуноглобулины, выделенные из иммунных сывороток и меченные флюорохромами.

Специфический антиген обнаруживается в виде ярко-зеленых люминесцирующих конгломератов, а фон препарата окрашивается в оранжево-красный цвет.

Компоненты реакции прямой иммунофлюоресценции:

1) исследуемый материал;

2) специфическая люминесцентная сыворотка;

3) люминесцентный микроскоп.

При диагностике гриппа проводят дифференциацию от возбудителей парагриппа и аденовирусной инфекции. Носоглоточный мазок обрабатывают флюоресцирующей гриппозной сывороткой или гриппозным иммуноглобулином.

«+» результат в виде зеленого свечения получают через 3 часа.

При непрямом методе проводят обнаружение и титрование специфических антител. Титром сыворотки называется ее максимальное разведение, при котором отмечается флюоресценция на «+ +».

Компоненты реакции непрямой иммунофлюоресценции

Для поиска антигена при экспресс-диагностике:

1) исследуемый материал (антиген);

2) специфическая сыворотка;

3) антиглобулиновая люминесцентная сыворотка

4) люминесцентный микроскоп.

/ фаза специфическая

Сывороточные антитела адсорбируются на антигене.

// фаза неспецифическая

Используется антиглобулиновая сыворотка с антителами , меченными флюорохромами. Образуется комплекс антиген+антитело (I) + антиглобулиновая сыворотка (II), который светится.

Цена: 8 296.00 RUB

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: HiMedia Laboratories

Страна: Индия

Ед. изм.: упаковка

Упаковка: 500г

Вид упаковки: полиэтиленовая банка

Артикул: M175-500G

Описание

Пропись основана на питательной среде J.Bordet & O.Gengou , модифицированная Kendrick, и рекомендована специалистами АРНА для диагностики коклюша.
Картофельный настой и пептический перевар животной ткани являются источником углерода и азота, глицерин и кровь - дополнительными источниками питательных веществ. Ввиду богатого состава эти среды позволяют получать обильный рост бордетелл, их можно использовать для приготовления биомассы бактерий в ходе приготовления коклюшной вакцины или для сохранения лабораторных штаммов бордетелл. Обогащение среды 15% бараньей крови позволит выделить Bordetella pertussis по способности к гемолизу. Добавление 25% человеческой крови позволяет определить присутствие микобактерий в небольшом количестве мокроты, а также определить их чувствительность к стрептомицину.
Среды можно сделать селективными, если в их состав ввести антибиотик, например, пенициллин, метициллин или, что особенно рекомендуется, цефалексин (в концентрации 40 мкг/мл) . В качестве противогрибкового средства в среду можно добавить амфотерицин В (10 мкг/мл).
Ассортимент размещен в специализированном разделе

Состав, грамм/литр:
Картофельный настой 125,00;
Пептический перевар животной ткани 10,00;
Натрия хлорид 5,50;
Агар-агар 20,00.
Конечное значение рН (при 25°С) 6,7 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок. Готовая среда имеет светло-желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует при затвердевании. По плотности соответствует 2% агаровому гелю. После добавления крови (15% об/об) среда должна иметь вишнево-красный цвет и опалесцировать.
Этикетка на упаковке на русском языке. Зарегистрировано в МЗ и СР РФ. Непрозрачные водоотталкивающие пластиковые флаконы с навинчивающимся колпачком, который имеет внутреннюю крышку, 0,5 кг/упак.
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.
Этикетка на упаковке на русском языке, содержит инструкцию по применению, информацию об условиях хранения и дату срока годности, по истечении которого использованию не подлежит.
Зрегистрированно в Росздравнадзор РФ