Все необходимое для определения группы крови. Какие бывают группы крови и как происходит их определение

Групповая принадлежность крови по системе АВО определяется с помощью реакции агглютинации. В настоящее время используют три способа определения групп крови по системе АВО:

по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрестный способ),

с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

При этом существует следующая общепринятая тактика при определении группы крови.

При плановом исследовании врач стационара определяет группу крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам или с помощью цоликлонов, после чего посылает кровь в серологическую лабораторию для проверки группы перекрестным методом.

Группа крови считается определенной только тогда, когда лаборатория подтвердит данные, полученные врачом стационара. Если результаты исследований расходятся между собой, оба исследования нужно При необходимости определения группы крови в экстренном порядке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови), врач стационара определяет группу сам (в лаборатории перепроверка производится, но постфактум). В таких случаях также используются реакции с изогемагглютинирующими сыворотками (или цоликлонами), но при возможности целесообразно применение перекрестного метода.

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам.

Этот способ в настоящее время наиболее распространен в клинической и лабораторной практике.

Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этих целей используется реакция агглютинации. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С.

Необходимое оснащение

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотки для определения групп крови изготавливают в специальных серологических лабораториях из донорской крови. Сыворотки хранят при температуре 4-8 "С (в холодильнике).

Срок годности сыворотки указан на этикетке. Титр сыворотки (также указывается на этикетке) должен быть не ниже 1: 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1: 16/32). Под титром сыворотки понимается то максимальное ее разведение, при котором может наступать реакция агглютинации. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая.

Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(1), А(Ы), ВЦП), AB(IV).

Изотонический раствор хлорида натрия.

Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).

Техника проведения реакции

Под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре).

Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: О (I), A (II), В (III).

Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закругленными краями перемешивают.

Возможна более простая методика: на тарелку наносят одну большую каплю крови, из которой ее забирают уголком предметного стекла и переносят в каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая с последней. При этом всякий раз кровь берут новым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не сливались.

После смешивания тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует обязательно вести до 5 минут ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2(Н).

В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

Трактовка результатов

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной.

При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд в смеси появляются видимые невооруженным взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна, а иногда в хлопья неправильной формы.

При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживается никаких зернышек (агглютинатов).

Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками.

При этом следует отметить, что, если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В и принадлежит к группе AB(IV).

Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB(IV), не содержащей агглютининов.

Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0(1), А(И) и В(Ш), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ0 (IV).

Следует отметить, что при наличии в исследуемой крови слабого подтипа антигена А2 реакция агглютинации с гемагглютинирующими сыворотками групп 0(1) и В(Ш) начинается позже (на 3-4 минуте).

Для точного определения подтипа антигена А необходимо проведение дополнительной реакции с так называемым анти-А, реактивом, изготовляемым из семян растения Dolichos bitforis, содержащим только анти-А, антитела (проводится в серологической лаборатории).

Наверняка каждый хотя бы раз в жизни сталкивался с анализом на определение группы крови. О том какие существуют способы определения группы крови и каким из них лучше всего проводить тест на принадлежность к тому или иному виду – тема сегодняшней статьи.

Зачем проводят исследование на группу крови?

В современной гематологии, под группой крови понимают специфический набор антигенов, расположенных на поверхности эритроцитов, определяющий их специфичность. Данных антигенов существует огромное количество (обычно, используется таблица групп со всевозможными антигенами), однако, во всем мире признана классификация крови по системе АВ0 и резус-фактору.

Группа крови обязательно определяется при подготовке к любым операциям. В число обязательных контингентов, в которых проводится определение группы крови, входят военные, работники силовых структур и внутренних органов. Данное мероприятие необходимо, так как в случае развития ургентного состояния (угрожающего жизни) может возникнуть необходимость в переливании, когда не будет времени проводить анализ и тест на ее совместимость с донорской.

Определение групп крови стандартными методами

Существует множество различных техник, но в клинических лабораториях чаще всего используют методику стандартных сывороток. Как определить группу крови по стандартным сывороткам?

Этот метод применяется для определения антигенов системы АВ0. Стандартная изогемагглютинирующая сыворотка имеет в своем составе набор специфических антител к поверхностным молекулам эритроцитов. При наличии антигена, на которое распространяется действие антител, происходит образования комплекса антиген-антитело, что провоцирует запуск каскада иммунных реакций. Ее результат - агглютинация эритроцитов, на основании характера агглютинации судят можно сделать заключение об отнесении образца к той или иной группе крови.

Стандартные сыворотки готовят из донорской крови по определенной системе - путем выделения плазмы с присутствующими в ней антителами и ее последующего разведения. Разведение проводят с помощью изотонического раствора натрия хлорида.

Разведение проводится следующим образом – в пробирку с 1 мл 0.9 процентного раствора пищевой соли добавляют 1 мл плазмы и тщательно перемешивают раствор. После, пипеткой отбирают 1 мл полученного раствора плазмы и добавляют его во вторую пробирку, содержащую изотонический раствор. Таким образом, достигается разведение плазмы в соотношении 1:256. Использование других разведений может привести к появлению диагностической ошибки.

Техника проведения исследования следующая – на специальный планшет для определения группы крови помещают по одной капле (общим объемом около 0.1 мл) каждой сыворотки в область с соответствующей пометкой (используются сыворотки двух образцов, среди которых один является контрольным, а второй используется для исследования). После этого, возле каждой капли сыворотки помещают исследуемый образец (0.01 мл), после чего он по отдельности смешивается с каждым видом диагностикума.

Через некоторое время (в среднем, около 5 минут) проводят анализ полученных результатов с описанием характера произошедшей реакции:

• если в исследуемом образце происходит агглютинация – тест положительный;
• если агглютинации нет, то реакция отрицательна.

Проще говоря, наличие агглютинации говорит о том, что в крови имеется необходимый набор агглютиногенов, и если она произошла, значит кровь принадлежит к той группе, антитела к которой содержатся в сыворотке. На основании полученных результатов строится таблица или схема, которая визуально отображает результаты.

Метод перекрестной реакции

Данная техника заключается в определении агглютиногенов с помощью цоликлонов или стандартных сывороток с параллельным выявлением агглютининов при помощи эталонных эритроцитов.

Методика проведения практически не отличается от определения группы крови при помощи сывороток, однако, есть некоторые дополнения.

На планшетку ниже нанесенных сывороток добавляют по одной малой капле стандартных эритроцитов. После этого, из пробирки, содержащей прошедшую через центрифугу кровь пациента, извлекают с помощью пипетки плазму, которую добавляют к стандартным эритроцитам, а находящиеся на дне ее эритроциты вносят в стандартную сыворотку.

Также как и при методике стандартных сывороток, полученные результаты оценивают через несколько минут после начала реакции. При наличии агглютинации в стандартных сыворотках судят о наличии агглютининов системы АВ0, а при развитии реакции плазмы со стандартными эритроцитами – об имеющихся агглютиногенах.

Перекрестный метод получил широкое распространение благодаря тому, что он предотвращает основные диагностические ошибки при определении крови стандартными методиками.

Определение группы цоликлонами

К использованию цоликлонов прибегают при невозможности определения антигенов системы АВ0 при помощи стандартных сывороток.

Цоликлоны – специфические антитела, полученные путем гибридизации их в живом организме (обычно, используются цоликлоны, полученные от мышей путем модификации В-лимфоцитов). Характерной их особенностью является развитие иммунной реакции между цоликлоном и антигеном А или В, расположенном на поверхности мембраны эритроцита.

Алгоритм использования моноклональных антител следующий: на планшетку наносится по одной крупной капле раствора цоликлонов (обязательно следует пометить, где и какие цоликлоны находятся). После этого, к сыворотке добавляют по одной капле исследуемой крови и оценивают полученные результаты через несколько минут.

Тест должен проводиться в специально созданных условиях с соблюдением температурного режима и влажности (перед тем, как провести данный анализ, необходимо убедиться в пригодности цоликлонов).

Тест считается положительным, если в исследуемом образце произошла агглютинация эритроцитов (т.е. прошла реакция между антителом и антигеном). Если положительный результат наблюдается в двух каплях, судят о принадлежности образца к IV группе. Если же наоборот, реакции не произошло ни в одном образце, то группа крови предположительно I. Ошибки при определении крови данной методикой встречаются редко.

Экспресс-методика “Эритротест”

Несмотря на то, что общепринятые методики определения групповой принадлежности крови повсеместно распространены, в настоящее время широко внедряются в медицинскую и лабораторную практику экспресс-методы определения группы крови. Одним из них является “Эритротест”.

Комплект для определения группы крови “Эритротест-группокарт” состоит из следующих компонентов:

• универсальная планшетка с пятью лунками для проведения определения группы по системе АВ0 и ее резус-принадлежности;
• скарификатор для получения образца для исследования;
• чистая пипетка с помощью которой проводят набор растворов;
• стеклянные палочки, использующиеся для перемешивания образцов.

Все перечисленное оснащение необходимо для правильного проведения экспресс диагностики.

Данная методика позволяет проводить определение группы крови и резус-фактора в любых условиях, особенно если нет возможности использовать классические методы.

Процесс проведения анализа с использованием методики «Эритротест»

В лунках планшетки находятся цоликлоны к поверхностным антигенам (цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ), а также к основному антигену, обуславливающему наследование резус-фактора (цоликлон анти-D). В пятой лунке находится контрольный реагент, позволяющий предотвратить ошибки и правильно провести анализ на групповую принадлежность.

Для оценки полученных результатов используется специальная таблица, в которой перечислены всевозможные результаты исследования.

Группа крови – это оригинальные антигенные характеристики клеток крови (эритроцитов), которые определяются с использованием способов распознания групп белков и углеводов, содержащихся в оболочке эритроцитов. Определить группу крови – обязанность каждого человека, для этого необходимо сдать анализ. На сегодняшний день в любой больнице или поликлинике можно сдавать свою кровь на исследование, поэтому трудностей с проведением данной процедуры не возникает, и каждому важно знать, как определить группу крови и откуда берут материал на исследование.

Группа крови в течение всей жизни у каждого человека остается неизменной. Люди с одним типом могут отличаться от людей с другим по причине того, что у каждого человека разное количество агглютиногенов A и B в кровяных клетках, а также совсем разное количество агглютининов α и β, которые содержатся уже в амбоцептере крови.

В природе существует несколько видов групп крови:

• 0(I) – эта содержит только агглютинины α и β, агглютиногенов нет.
• A(II) – содержится только агглютинин β и агглютиноген A.
• В(III) – агглютинин α и агглютиноген B.
• AB(IV) группа крови - содержит агглютиногены A и B, агглютинины отсутствуют.

Откуда появилась классификация? Впервые открыл все существующие типы крови у людей врач из Австрии. Это открытие позволило ученому получить премию А.Нобеля по медицине в 1930 году. Также открытие групп помогло остановить смертельные исходы в процессе от одного человека другому . Человек, которому необходимо сделать переливание называется реципиентом. Человек же, что сдает свою кровь, называется донором. Наиболее подходящим типом для реципиента будет кровь идентичная его типу.

Помимо существующих антиглютиногенов A и B в кровяных клетках можно наблюдать и другие антигены, например, резус-факторы. В ситуации, если кровь не совместима по резус-фактору, то проводить переливание категорически запрещено. Впоследствии могут возникнуть плачевные случаи, вплоть до летального исхода.

Проведение исследования

Как узнать группу крови, откуда ее берут для исследования? Эти вопросы интересуют всех заинтересованных людей. Для этого можно обратиться в лечебное учреждение, где нужно сдать биологическую жидкость из пальца. Анализ на группу крови можно проводить тремя основными способами:

• по изогемагглютиновым сывороткам;
• по изогемагглютиновым сывороткам и стандар­тным клеткам крови (перекрёстный способ);
• метод с применением МКА (цоликлоны анти-A и анти-B).

Обычно в лабораториях переливания крови проводят исследование по первому способу, т.е. с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток. Процесс заключается в том, что тест проводится на обнаружение антиглютиногенов A и B в освещенной лаборатории с температурой воздуха в пределах 15-25 °C. Для этого берут исследуемый материал и на специально подготовленную тарелку или пластину наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворот­ки I, II, III групп в объеме 0,1 мл.

Чтобы избежать возникновения каких-либо неточностей, наносят две серии сывороток каждого из типов. Должно получиться 6 капель. Эти 6 ка­пелек образца анализируемой биожидкости переносят на специальную пластину в другие 6 точек, при этом каждую каплю размещают рядом с (крови понадобится в 10 раз меньше, чем используемое количество сыворотки), после этого их аккуратно смешивают уже другими палочками со слегка закругленными краями. Во время смешивания пластину аккуратно покачивают из стороны в сторону. Склеивание клеток происходит в течение 30 секунд. В те капли биологической жидкости, где прошло соединение, добавляется немного изотонного раствора хлорида натрия, и оценивается результат теста.

Вторым тестом на группу является перекрёстный метод. Его чаще применяют в серологических лабораториях. Перекрестный метод заключается в том, что сдавать биологический материал нужно на определение содержания антиглютиногенов A и B с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток и антител α и β при помощи эритроцитов. Для этого на специальную тарелку белого цвета наносят маркером 6 клеток, в которые капают пипеткой по 1 капле сыворотки из анализируемой биожидкости, а рядом располагают по маленькой капле эритроцитов определенных групп 0(I), A(II), B(III) – по два раза.

Отличительной и главной особенностью этого метода является то, что эритроциты группы 0(I) главные, т.к. они не содержат антигенов. Эта особенность делает невозможным соединение эритроцитов с любой из сывороток.

В третьем тесте на выявление применяют МКА. Используется гибридомная биотехнология. Гибридома представляет собой гибрид клеток, полученных из миеломы и иммунного лимфоцита, что производит МКА. К моноклональным антителам (МКА) относят: цоликлоны анти-A и цоликлоны анти-B. Их наносят на приготовленную пластину белого цвета по 1 большой капле под специальными надписями анти-A и анти-B. После, рядом с каплями антител размещают по маленькой капле анализируемой биожидкости. Агглютинация происходит в последующие 2–3 минуты.

Погрешности при проведении исследования

Определение группы крови описанными тестами может осложниться появлением некоторых характерных ошибок. Все возможные ошибки можно классифицировать на три группы: технические, биологические и сывороточные.

К техническим ошибкам относятся поспешная оценка результатов, несоблюдение режима нужной температуры, отсутствие маркировки платин, неверное соотношение количества крови и сыворотки. Биологические ошибки появляются в тех случаях, когда красные кровяные тельца соединились со всеми сыворотками, на исследование берут инфицированную биожидкость, происходит полная панагглютинация, неактивные антигены A и B. Сывороточные ошибки могут быть, если берут инфицированную, просроченную или сыворотку с титром ниже 32.

Во избежание указанных погрешностей нужно соблюдать строгие правила при проведении тестов на установление своей группы . Следует использовать разные тарелки (чистые и сухие), категорически нельзя смешивать компоненты одной и той же палочкой, следить за сроками и температурой, ну и конечно, процедура определения группы крови не должна проходить в домашних условиях, а только в медицинском учреждении специалистами.

Таким образом, только исследования в лабораторных условиях помогут ответить на главный вопрос, как узнать группу крови. И никакая иная информация или советы других людей не позволят узнать свою группу, особенно в домашних условиях. Поэтому для тех, кто задается вопросом, какая у меня группа крови, для проведения правильного исследования с точными результатами необходимо специальное оборудованное помещение, где будут соблюдаться все требования, а не домашние условия с использованием подручных предметов.

Алгоритм действий при определении группы крови и резус-фактора
при поступлении женщины в родильный дом

Определение группы крови системы АВ0 моноклональными антителами

Подготовить:

• сухое предметное стекло (типовую тарелочку) для определения группы крови;
• цоликлоны анти-А (розового цвета) и анти-В (синего цвета);
• две пипетки для взятия цоликлонов из флаконов;
• две стеклянные палочки для смешивания крови пациентки с цоликлонами;
• одноразовый шприц (на 5-10 мл) с иглой для взятия крови из вены пациентки;
• в стерильный лоток положить 3 шарика, смоченных спиртом, 2-3 стерильные салфетки;
• резиновый жгут для внутривенных пункций;
• сухую центрифужную пробирку, на которой стеклографом отчетливо подписать фамилию пациентки;
• бланк - направление в лабораторию, где врачом - лаборантом повторно определяется группа крови, резус принадлежность, ставится печать и подпись

Соблюдая все правила для внутривенных пункций, произвести забор крови из вены пациентки (не менее 5 мл).

• Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на планшет или пластинку по одной большой капле (0,1) под соответствующими надписями: анти-А и анти-В.
• Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле (0,01 мл).
• После смешивания реагентов и крови разными стеклянными палочками для анти-А и анти-В в соотношении 1:10 за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2,5 мин.
• Чтение результатов через 5 минут при помешивании капель. (от 3-х до 5 минут)
• Результат оценивается врачом. Оценка результатов реакции агглютинации с Цоликлонами анти-А и анти-В представлена в таблице, в которую также включены результаты определения агглютининов сыворотке (плазме) доноров с помощью стандартных эритроцитов.

С целью исключения аутоагглютинации, которая может наблюдаться в пуповинной крови новорожденных, в случае установления группы крови АВ(IV) необходимо произвести контрольное исследование: одну каплю (0,1 мл) изотонического раствора хлористого натрия смешать с маленькой каплей (0,01 мл) исследуемой крови. Реакция агглютинации должна ОТСУТСТВОВАТЬ.

А. Внимательно заполнить все графы бланка - направления в лабораторию для определения группы крови и резус принадлежности с подписью врача.

В. Доставить бланк-направление и пробирку с кровью пациентки в лабораторию для тщательного определения группы крови и резус принадлежности пациентки.

Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (Цоликлон анти-D Супер)

На тарелку наносят большую каплю реагента (около 0,1 мл). Рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешивают кровь с реагентом. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 сек, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 сек. (резус положительная, нет агглютинации – резус отрицательная). Результаты реакции учитывают через 3 мин.

Тарелку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 сек, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.

Экспресс-определение групп крови АВО и резус с использованием набора "Эритротест-группокарт"

Набор "Эритротест-группокарт" (ООО "Гематолог", Москва) предназначен для определения АВО и Резус (RhD) групп крови человека в лабораторных и полевых условиях. Определение проводится в реакции прямой гемагглютинации и не требует никаких вспомогательных реактивов и оборудования. В состав набора входят:

• карточка "Эритротест-группокарт";
• пипетка с дозированным объемом капли около 0,02 мл;
• стерильно упакованный скарификатор;
• палочка для смешивания крови с реагентом.

В лунках карточки находятся высушенные моноклональные реагенты анти-А, анти-В, анти-АВ и анти-D, которые немедленно растворяются при добавлении воды. Моноклональные анти-D-антитела специфично выявляют антиген RhD независимо от группы АВО. В последней лунке находится растворитель для постановки контроля на неспецифическую аутоагглютинацию.

Ход определения:

Определение производят в нативной крови с консервантом, в крови без консерванта или крови, взятой из пальца.

• Вскрывают упаковку и достают карточку, не дотрагиваясь до лунок с рабочей поверхностью. Вписывают данные пациента, кроме группы крови.
• В каждую лунку вносят 1 каплю воды (водопроводной или дистиллированной), используя вложенную в набор пипетку. Воду наносят на пятно высушенного реагента. Нельзя допускать подсыхания капли.
• Вносят в каждую лунку маленькую каплю исследуемой крови. Кровь наносят рядом с каплей реагента, не касаясь его, чтобы избежать загрязнения одного реагента другим. Для взятия крови из пальца используют стерильный скарификатор.
• Тщательно смешивают кровь с реагентом с помощью палочки, вложенной в набор. В каждой лунке смешивание производят только новой палочкой. Использование одной палочки для перемешивания в разных лунках не допустимо, т. к. ведет к загрязнению реагентов и ошибочному определению группы крови.
• Сразу покачивают пластинку. Четкая агглютинация наступает через 10-30 с, однако окончательный результат следует учитывать через 3 мин, т.к. в случае слабых форм антигена А реакция наступает позднее, а агглютинаты мельче.
• Результат оценивают визуально (табл. 18.6). В квадраты под каждой лункой вписывают результат реакции с соответствующим реагентом (+ или -).

  Таблица 18.6. Результаты реакции в наборе "Эритротест-группокарт" и группа крови
  Анти-А	Анти-В	Анти-АВ	Анти-О	Группа крови
  -	-	-	-	0(I) Rh - отриц.
  -	-	-	+	0(I) Rh - полож.
  +	-	+	-	А(II) Rh - отриц.
  +	-	+	+	А(II) Rh - полож.
  -	+	+	-	В(III) Rh - отриц.
  -	+	+	+	В(III) Rh - полож.
  +	+	+	-	АВ(IV)Rh - отриц.
  +	+	+	+	АВ(IV) Rh - полож.

• Вписывают группу крови. Заключение о группе крови можно делать только в случае отсутствия реакции в контроле (последняя лунка).
• Отрезают по линии лунки с кровью, а карточку сохраняют.

Срок хранения набора "Эритротест-группокарт" - 2 года при температуре 2- 8°С. Допускается хранение в течение 1 года без холодильника, если температура не превышает 25°С. Хранение и использование незапаянных или поврежденных пакетов не допускается.

Принадлежность группы крови проводится при комнатной температуре: +15..25°C. На маркированной тарелке белого цвета записывается фамилия лица, у которого производится определение. Затем на эту же тарелку наносится по 2 капли стандартных сывороток (каждая сыворотка наносится своей пипеткой) групп Oαβ(I), Aβ(II), Bα(III) двух серий (расстояние между каплями не менее 5 см).

Справа от капель сывороток помещаются капля исследуемой крови, которая должна быть в 5-10 раз меньше капель сывороток.

Кровь перемешивают с сыворотками. Делают это стеклянной палочкой или одним и тем же углом предметного стекла. После каждого перемешивания палочка (стекло) промывается в воде и вытирается насухо.

За ходом реакции наблюдают в течение 5 минут, периодически покачивая тарелку.

В те капли, где к 3-й минуте наблюдения произошла агглютинация, вводят по 1 капле физраствора (чтобы дифференцировать псевдоагглютинацию), после чего еще наблюдают 2 минуты.

Результат оценивается по наличию агглютинации по истечении 5 минут наблюдения:

• кровь Oαβ(I) группы - со стандартными сыворотками агглютинации не наступило;
• кровь Aβ(II) группы - агглютинация наступила с сывороткой Oαβ(I) и Bα(III), и не наступила с сывороткой Aβ(II);
• кровь Bα(III) группы - агглютинация наступила с сывороткой Oαβ(I) и Aβ(II), и не наступила с сывороткой Bα(III);
• наличие агглютинации со всеми стандартными сыворотками еще не позволяет отнести кровь к AB O (IV) группе, т.к. возможна панагглютинация. В таком случае на тарелку наносится 2 капли стандартной сыворотки AB O (IV) группы и добавляется к ним капля исследуемой крови - если через 5 минут агглютинации не произошло, то кровь относят к AB O (IV) группе.

Двойная реакция

Кровь для исследования берется и вены в объеме 5 мл в чистую сухую пробирку без добавления цитрата, чтобы можно было получить отдельно сыворотку и эритроциты.

Кроме стандартных сывороток берутся стандартные эритроциты групп, которые готовятся в специальных учреждениях службы крови.

Тарелка делится на две части горизонтальной линией. В верхней части ведется исследование стандартными сыворотками с исследуемыми эритроцитами; в нижней части - стандартными эритроцитами с исследуемой сывороткой.

По истечении 5 минут производится оценка и делается заключение о группе крови.

Определение групп крови моноклинальными антителами

Моноклинальные антитела (ABO-титрующие: цоликлоны анти-А и анти-В) получаются при помощи генной инженерии. Их готовят в промышленных масштабах из крови стерильных мышей, поэтому исключается заражение гепатитом или СПИДом. Цоликлон анти-А окрашивается в голубой цвет; анти-В - в розовый.

Цоликлоны наносятся на планшет одной большой каплей (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А, анти-В. Рядом наносится по одной маленькой (0,01 мл) капле исследуемой крови. После смешивания реагентов и крови реакцию агглютинации наблюдают в течение 2,5 минут.

Оценка результатов:

• кровь Oαβ(I) группы - агглютинации нет ни с цоликлоном анти-A, ни с анти-B (эритроциты не содержат антигенов A и В);
• кровь Aβ(II) группы - агглютинация произошла только с цоликлоном анти-A (эритроциты содержат только антиген A);
• кровь Bα(III) группы - агглютинация произошла только с цоликлоном анти-B (эритроциты содержат только антиген B);
• кровь AB O (IV) - агглютинация наблюдается с обеими цоликлонами (эритроциты содержат оба антигена). В этом случае производится контрольное исследование дабы исключить аутоагглютинацию. Одна капля (0,1 мл) изотонического раствора хлорида натрия смешивается с каплей (0,01 мл) исследуемой крови - реакция агглютинации должна отсутствовать.

ВНИМАНИЕ! Информация, представленная сайте сайт носит справочный характер. Администрация сайта не несет ответственности за возможные негативные последствия в случае приема каких-либо лекарств или процедур без назначения врача!